石斛蘭,蘭科植物之一,主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶,澳大利亞和太平洋島嶼,我國(guó)大部分分布于西南、華南、臺(tái)灣等地。石斛蘭的主要品種有金釵石斛、密花石斛、鼓槌石斛等??扇胨?,名為石斛,對(duì)人體有驅(qū)解虛熱,益精強(qiáng)陰等療效。隨著花卉產(chǎn)業(yè)的興起,石斛蘭也成為了一種觀賞植物。石斛蘭的栽培方式一般為盆栽。由于石斛蘭具有秉性剛強(qiáng)、祥和可親的氣質(zhì),被譽(yù)為父親之花。石斛蘭的植株由肉莖構(gòu)成,粗如中指,葉如竹葉花葶從葉腋抽出,每葶有花七八朵,每花6瓣,四面散開(kāi),花瓣邊均為紫色,瓣心為白色。
石斛蘭無(wú)菌播種與組織培養(yǎng)
無(wú)菌播種
石斛蘭的種子極為細(xì)小,胚胎發(fā)育不完全,所謂的胚實(shí)際上就是一團(tuán)未分化的胚細(xì)胞,且無(wú)胚乳組織,在自然狀態(tài)下發(fā)芽率極低,只有與蘭菌共生才能少量發(fā)芽,成苗更難,因此不能像其他植物一樣在大田或苗床上播種,只有在無(wú)菌的補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的人工培養(yǎng)基上,促進(jìn)其萌發(fā)成苗。
1、種子的采收與播種
應(yīng)用于無(wú)菌播種的石斛蘭的種子的果實(shí)以剛成熟但尚未開(kāi)裂時(shí)效果較好,未成熟時(shí)能發(fā)芽,但發(fā)芽率略低,而如果果實(shí)成熟開(kāi)裂,種子難以收集與消毒,且種子發(fā)芽力降低。種子采收后宜即采即播,否則會(huì)影響發(fā)芽率,未來(lái)得及播時(shí),應(yīng)用密封的塑料袋裝好放入4℃的冰箱中保存,但時(shí)間不宜過(guò)久,否則易長(zhǎng)霉或降低發(fā)芽率。
在進(jìn)行無(wú)菌播種操作時(shí),可采用如下步驟:
(1)無(wú)菌播種一般在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行,在操作前準(zhǔn)備好所有的藥劑和工具,保持超凈工作臺(tái)的無(wú)菌狀態(tài)。
(2)石斛蘭果實(shí)一般在成熟未開(kāi)裂前采收,對(duì)于雜交不親和的種類可采取未成熟的果實(shí),采收后先將果實(shí)表面的臟物沖洗干凈,將上下兩端切除。
(3)將果實(shí)置于75%乙醇中浸10~15秒,再在5%~10%漂白粉溶液中、或0.1%的升汞溶液中、或3%的雙氧水,或5%的安替福民溶液中浸5~20分鐘,以無(wú)菌水沖洗數(shù)遍。
(4)用無(wú)菌濾紙擦干后,再用解剖刀切開(kāi)果實(shí),里面的黃色粉狀物即為石斛蘭種子。
(5)用鑷子輕輕將種子取出播于培養(yǎng)基中。
(6)播種后稍加搖動(dòng),使種子均勻散布于培養(yǎng)基中,但要避免將種子埋入培養(yǎng)基內(nèi),引起窒息死亡。播種密度以每瓶的種子數(shù)量以大致都能接觸到培養(yǎng)基為度,太密時(shí)會(huì)影響發(fā)芽率及發(fā)芽后的正常生長(zhǎng)。如果果實(shí)在采收前已經(jīng)開(kāi)裂,也可用上述同樣的方法處理,若種子不下沉,可加幾滴濃酒精。種子消毒后,用無(wú)菌水沖洗數(shù)遍,再用濾紙過(guò)濾的方法除去溶液,取出種子用于接種。
(7)將播種后的玻璃瓶移入培養(yǎng)室或培養(yǎng)箱中或有散射光的地方,培養(yǎng)溫度20℃~26℃,溫度過(guò)高易褐變死亡,溫度過(guò)低發(fā)芽慢。
(8)1周左右,胚明顯增大,補(bǔ)充2000~3000勒克斯的光照,每天10~18小時(shí)效果較好。接種后1~2種子變成綠色,表明胚上已生成葉綠素,1個(gè)月左右種胚突變種皮,長(zhǎng)成頂端有綠色的葉原基,球體基部有絲狀毛的原球莖。在播后的2~3個(gè)月,第一枚葉片從原球莖頂部中間生出。在出現(xiàn)2~3片葉時(shí),原球莖伸長(zhǎng),并且有第一條根生出。在播種后4~5個(gè)月,較大的苗可出盆移栽于小盆中。較少的苗轉(zhuǎn)移到相同培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。
(9)如果播種較密,通常在長(zhǎng)出第一枚葉片時(shí)就分瓶,分瓶后以蘭花專用培養(yǎng)瓶效果最好,一般每瓶幼苗保持20株左右為佳。在播種后3個(gè)月,將其移入另外的培養(yǎng)基中,加大生長(zhǎng)空間,形成能用于栽培的植株。
(10)當(dāng)石斛蘭小苗長(zhǎng)到3cm~5cm、有2~3株較好的根時(shí),可將幼苗移出培養(yǎng)瓶,栽植到盆中。小苗從培養(yǎng)瓶中取出后,要輕輕用水清洗根部的培養(yǎng)基,栽培介質(zhì)宜用切碎的苔蘚、泥炭、碎木炭和少量砂配成的培養(yǎng)土,將小苗栽在小盆中,每盆3~5株。而后放在25℃左右的溫室內(nèi),保持較高的空氣濕度和較強(qiáng)的散射光。每周施一次液體肥料,并噴灑抗菌劑,1個(gè)月后可移至光線較強(qiáng)的地方。
(11)隨著植株的長(zhǎng)大要及時(shí)換盆,并移入溫室栽培。
(12)石斛蘭播種苗一般在出瓶后,2~3年左右能開(kāi)花。
2、培養(yǎng)基的選擇
石斛蘭的播種培養(yǎng)基多種多樣,不同的品種的最適培養(yǎng)基不同,比較常用的基本培養(yǎng)基有MS、改良MS、Nistch、N6、RE等。播種培養(yǎng)基中一般不需加激素就能萌發(fā),但有些品種在加入低濃度的6-BA、椰子汁、香蕉汁時(shí),能提高萌發(fā)率,并加快萌發(fā)速度和生長(zhǎng)速度。
培養(yǎng)基的配制
首先要根據(jù)培養(yǎng)基配方,算好母液吸取量,并按順序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸餾水定容至所需體積,并用0.1mol/L的HCl或NaOH調(diào)整pH值(pH5.5~5.8),加入瓊脂加熱熔化,配制好的培養(yǎng)基要趁熱分注,倒入試管、三角瓶或其它玻璃瓶等培養(yǎng)器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最后加塞或封口準(zhǔn)備消毒。目前,為了運(yùn)輸方便,一些試管苗工廠已采用一次性的聚脂纖維袋。
3、培養(yǎng)基的消毒
由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),極適合細(xì)菌和真菌的養(yǎng)殖,造成污染,影響組培的成功,因此培養(yǎng)基消毒是必不可少的一個(gè)環(huán)節(jié)。消毒的方法一般有高溫高壓消毒和過(guò)濾消毒兩種方法。
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